Trabajos Originales

Recibido para revisión: 19/01/2004
Aceptado para publicación: 26/07/2004

Evandro L. Ribeiro;* Maria Lúcia Scroferneker;** Mara S. Carvalhaes;** Cerise de C. Campos;*** Wesley M. Ferreira;**** Cléver G. Cardoso;**** Gustavo M. Nagato;***** Niwmar A. de Sousa;***** Sueli Meira da S. Dias.******

* Profesor Asociado, Cátedra de Micología, Instituto de Patología Tropical y Salud Pública (IPTSP) / UFG, Brasil

** Profesores Asociados, Cátedra de Inmunología, Instituto de Ciências Básicas de la Salud (ICBS) / UFRGS e IPTSP/ UFG, Brasil.

*** Profesor Asociado, Cátedra de Odontología Pediátrica, Facultad de Odontología (FO) / UFG, Brasil

**** Estudiantes de pregrado de la Universidad Federal de Goiás (UFG) y Universidad de Brasilia (UnB) - Brasil

***** Estudiantes de pregrado en Cirugía Dental, Universidad Federal de Goiás - Brasil

****** Biomédica, Universidad Federal de Goiás - Brasil

RECONOCIMIENTOS (agradecimiento):
Los autores agradecen la contribución del Profesor Doctor Marco Tulio García-Zapata, del Instituto de Patología Tropical y Salud Pública de la Universidad Federal de Goiás, en Goiânia/GO-Brasil, en la revisión del texto.

I-INTRODUCCIÓN
La cavidad bucal de los niños con el Sindrome de Down(SD) constituye una de las microbiotas humanas favorables para hospedar las candidiasis(1,2,3). Esta capacidad de patogenicidad de la Candida se debe a la adhesión de la levadura a las células del hospedero, después de la multiplicación, formación de tubo germinal y posteriormente del micelio, con liberación de las exoenzimas (aspartil proteinasas y fosfolipasas), que inducen a daños tisulares y alteran la microbiota tópica, permitiendo la inserción e invasión micótica, induciendo una respuesta inflamatoria tisular adyacente (células fagocitarias) y ocasionamente, diseminación sistémica dependiente del estado inmunológico del hospedero-inmunidad celular(3,4,5). Ínter-asociada a las alteraciones anatomo-fisiológicas de la boca de los niños sindrómicos (acromicia, macroglosia relativa, lengua con hendidura, hipertrofia papilar, lengua geográfica, paladar duro pequeño y ojival, lengua protráctil, hipotonicidad muscular, mordida abierta anterior y mordida cruzada, enfermedad periodontal, anomalías dentales, maloclusión dental, pH alto y fisuras del borde de los labios) constituyendo como este factores adicionales para la multiplicación de cepas de Candida y por consiguiente para la infección de este hongo levaduriforme(6,7).

Los niños con el SD, también, presentan un compromiso del sistema inmunológico cuando la respuesta es innata y adquirida, detectada a través de las alteraciones de los isótopos de las inmunoglobulinas, favoreciendo así que los aislados de Candida puedan inducir en forma seguida procesos de colonización y de patogenicidad bucal(3,8).

La ocurrencia de levaduras de Candida en la boca de niños con el SD se ha descrito con una incidencia de hasta 69.0% de los casos analizados, vinculados con una candidiasis bucal de 40.0%. Aproximadamente 20 a 55.0% de la población assindromica puede presentar aislados de Candida como levaduras participantes de la cavidad bucal del hombre(1,3).

Como forma clínica más común de candidiasis bucal se tiene a la candidiasis seudo-membranosa, conocida vulgarmente como "sapinho"(beso de araña) en el Brasil. Esta enfermedad parece ser un hallazgo importante en los niños con el SD. Sus lesiones se presentan como placas lisas, de color crema, blanco-amarillentas, débilmente adherentes, con una distribución variable, pudiendo alcanzar todas las regiones de la boca. En ciertos casos, en los exámenes histopatológicos, también, se observan edemas, micro-abscesos e intenso infiltrado inflamatorio, rodeado de seudo-micelios de Candida que invaden el epitelio bucal(9).

La diversidad de la expresión de las colonias gigantes de Candida, observada en el medio de Agar Sabouraud-Glucosa (ASG), muestra una multiplicidad de aspectos fenotípicos de este hongo levaduriforme, que sirven de base para estudios conductuales mico-epidemiológicos y comparativos entre individuos portadores o no de alteración cromosómica. Con la intención de comprender mejor los mecanismos de los procesos saprofitos y/o patogénicos de cepas de Candida, que muestran a la boca como una fuente endógena de esta levadura durante el pasaje de las microbiotas bucales desde la pionera hasta la definitiva(5,10).

El presente trabajo tuvo por objetivo determinar el perfil del cargamento levaduriforme bucal y correlacionar los aspectos macroscópicos de las colonias gigantes de Candida aisladas de la mucosa bucal de los niños con y sin SD.


II- MATERIALES Y METODOS

II-1. POBLACIÓN DE ESTUDIO
Fueron colectadas 60 muestras de secreción salivar de la mucosa yugal (región malar) de niños atendidos en la Clínica de Odontología Pediátrica de la Facultad de Odontología de la Universidad Federal de Goiás (FO/UFG) en la ciudad de Goiânia/Goiás - Brasil, siendo 30 muestras de niños portadores del SD ("sindrómicos") y otras 30 muestras de niños sin el SD ("asindrómicos"), constituyendo el grupo control. Todos los niños fueron examinados clínica y odontológicamente. Los padres o responsables dieron todas las informaciones sobre edad y uso de medicamentos.

II-2. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
La secreción salivar fue colectada con hisopos (escobillones de algodón) esterilizados, de la boca de los niños. Inmediatamente, fue colocada en tubos de ensayo que contenían 4 ml de suero fisiológico, y llevada al Laboratorio de Micología de la Universidad Federal de Goiás (UFG) en la ciudad de Goiânia/Goiás-Brasil. Después de la homogenización de cada solución de salina, conteniendo la secreción salivar dispersa en el medio, este material fue sembrado en tubos del ensayo que contenían Agar Sabouraud-Glucosa (ASG) e cloranfenicol a temperatura ambiental durante 15 días. Las colonias levaduriformes blanco-amarillentas, cremosas y húmedas que crecieron fueron identificadas por la investigación de los tubos germinales en el suero fetal bovino, la formación del clasmidósporos en el "Agar-corn-meal" (de maíz) con Tween 80® y realización de pruebas bioquímicas de asimilación y fermentación de carbono(11).

II-3. COLONIAS GIGANTES DE CEPAS DE C. albicans
La formación de colonias gigantes partió de la siembra de muestras de levaduras, cultivadas por 24 - 48 horas en ASG con cloranfenicol, en la región central de las placas de Petri que lo contenían y que fueron incubadas a 25oC. El análisis, después de 20 días, fue realizado observándose: el aspecto de la superficie, el color, el brillo y el diámetro de las colonias constituidas(5,10,11).

II-4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
El análisis estadístico fue realizado a través de la prueba de X² (Chi-cuadrado) y los valores fueron considerados estadísticamente significantes cuando p < 0.05.


III-RESULTADOS

III-1. Aislados de Cepas de Candida
De las 30 muestras de secreción salivar obtenidas de la mucosa yugal de niños con el SD, se identificaron 25 (83.3%) cepas de C. albicans. En las otras 30 muestras de secreción salivar de niños asindrómicos fueron identificadas cinco (16.7%) de la misma especie de Candida. El análisis del cargamento de levaduras de Candida entre las mucosas bucales de los niños de los grupos del estudio (con el SD) y del control (sin el SD) reveló diferencia estadística (X² = 26.7; p < 0.05) para el grupo sindrómico. Todos estos niños se encontraban en el grupo de edad de 0 a 10 años y no poseían ninguna lesión bucal, ni estaban tomando medicamentos, y también, no presentaban ningún cuadro clínico infeccioso en el momento de la investigación (Tabla 1).

III-2. COLONIAS GIGANTES DE C. albicans
Todas las colonias gigantes de C. albicans constituidas, entre los NCSD o NSSD, fueron blanco-amarillentas y opacas con un diámetro promedio de 3.7cm y con un predominio de colonias con centro arrugados (rugosos) y de periferia con franjas (Tabla 2).

IV-DISCUSIÓN
La presencia de levaduras de Candida en la boca del niño desde el nacimiento transforma esta cavidad, en un área que además de estar colonizada, es susceptible a desencadenar candidiasis, debido a la ruptura del equilibrio hospedero-parásito por factores biológicos, físico-químicos e iatrogénicos(1,2,6,9). Las alteraciones bucales, en los niños con el SD, inducidas por la trisomía del cromosoma (21) comprometen la estructura de los huesos, lengua, arco dental, encías y mucosa. Las manifestaciones patogénicas de la Candida comienzan a ser frecuentes, principalmente cuando la dieta alimentaria de estos niños es rica en carbohidratos, y está asociada a mala higiene bucal y uso de antibióticos constantes, por las infecciones respiratorias repetidas(6,7). Esta situación se empeora más por el déficit inmunológico presente en los individuos portadores del SD. Los neutrófilos, linfocitos y "natural killer" se encuentran con la función alterada. Las infecciones microbiológicas son más acentuadas debido a los bajos índices de anticuerpos IgG₂ e IgG₄ y al índice de peróxido-desmutasa que es 1.5 veces mayor, ocasionando que los mecanismos de defensa del organismo sean afectados(3).

En estas condiciones Staphylococcus y Candida se constituyen en los microorganismos más frecuentemente asociados a las patologías bucales en los niños con el SD, evidenciándose que el índice acentuado de cargamento de levaduras de Candida en la boca de estos niños se constituye en un factor inductor de la candidiasis bucal(3,8). Carstedt y cols(1) constataron este mismo hecho en niños y adolescentes suecos portadores del SD, que mostraron un aumento en la detección de aislados de Candida en la mucosa bucal. Aspecto también descrito en este estudio, en el cual mostramos un aumento en la prevalencia de aislados de C. albicans en la mucosa bucal de los niños con este sindrome, cuando comparados al grupo asindrómico. Sin embargo, el cargamento de levaduras de Candida en la mucosa bucal integra, y en individuos asindrómicos de acuerdo a la literatura fluctúa entre 20 y 55.0%(1,3), diferente a lo observado en nuestro estudio.

Las características morfológicas expresadas por las colonias gigantes de C. albicans revelaron la potencialidad genética que este hongo levaduriforme mantiene frente a la variabilidad fenotípica expresa. Esta capacidad se debe probablemente a las habilidades mutacionales y/o al dimorfismo inherente de este hongo. Aún más, la descripción macroscópica de estas colonias procedentes de diferentes materiales biológicos nos sirven para hacer un rastreamento de los múltiples fenotipos adjudicados a las levaduras de Candida, que deberán ser mejor explicados a través del entendimiento de la manifestación de la estructura génica del hongo por intermedio de futuros estudios en las cepas de Candida por técnicas de biología molecular(4,5,10).

En relación a las colonias gigantes de C. albicans procedentes de la mucosa bucal de los niños con y sin el SD, los mismos aspectos fenotipos fueron observados. Aunque, llama la atención en ambos casos, el número de cepas de C. albicans productoras de franjas en la periferia, lo que correlaciona con uno de los atributos de virulencia levaduriforme en relación a la capacidad de adherencia de la Candida a la superficie de la mucosa(4). Sin embargo, la presencia del SD en los niños en estudio no parece afectar a la virulencia de la Candida, y sí a las secuelas anátomo-fisiológicas derivadas de esta alteración cromosómica favoreciendo, por consiguiente, a la mayor capacidad de colonización y patogenicidad de los aislados de Candida de la mucosa bucal de los niños con este cromosomopatia(3,6,7).

V- CONCLUSIONES
Los niños con el SD revelaron poseer un mayor potencial de "portador" de cepas de C. albicans en la boca, si comparado con los niños asindrómicos, lo que los predispone más a una candidiasis.

El análisis morfológico comparativo de las colonias gigantes de C. albicans, aisladas de la cavidad bucal de los niños con y sin el Sindrome de Down (SD), no mostraron diferencias macroscópicas en esas colonias revelando que el SD probablemente no interfiere con las características fenotípicas de estos hongos, sin embargo sus secuelas (alteraciones anátomo-fisiológicas), y talvez, alteraciones inmunológicas puedan favorecer a la colonización levaduriforme de la boca de estos niños sindrómicos, ocasionandoles una mayor susceptibilidad a la infección bucal por Candida.