Trabajos Originales

Expresión de p53 y Ki-67 en Ameloblastomas Acantomatosos

Recibido para Arbitraje: 12/05/2013
Aceptado para Publicación: 13/07/2013

    Manresa, C., Especialización Cirugía Bucal y Maxilofacial. Facultad de Odontología, Universidad Gran Mariscal de Ayacucho. Villarroel-Dorrego, M., Profesora de la Facultad de Odontología, UCV, Instituto de Investigaciones Odontológicas

    CORRESPONDENCIA: mariana.villarroel@ucv.ve

EXPRESIÓN DE p53 Y Ki-67 EN AMELOBLASTOMAS ACANTOMATOSOS

RESUMEN
El Ameloblastoma Acantomatoso es una variante histopatológica donde la parte central de las células Epiteliales Odontogénicas sufren una metaplasia escamosa. Este cambio biológico podría darle a esta forma de ameloblastoma características de mayor agresividad y recidiva. El objetivo del presente trabajo fue determinar la expresión de las proteínas p53 y Ki-67 en ameloblastomas acantomatosos. Metodología: 12 especímenes diagnosticados histopatológicamente como ameloblastoma acantomatoso fueron examinados y la expresión de p53 y Ki-67 determinada inmunohistoquímicamente usando los anticuerpos anti-humanos clones DO-7 y MIB-1 respectivamente (DAKO®). La expresión de ambas proteínas fue evaluada mediante microscopio de luz y la intensidad y número de núcleos positivos semicuantificados y analizados mediante estadística descriptiva. Resultados: La expresión de p53 fue observada en el 50% de los casos tanto en las células basales como centrales de las islas tumorales. La expresión de Ki-67 fue observada en el 66,7% de los casos, en su mayoría tanto en las células basales como tumorales y en su totalidad de fuerte intensidad. Conclusiones: La expresión de p53 y Ki-67 en los ameloblastomas acantomatosos sugiere una proliferación celular acelerada y por ende una mayor capacidad de crecimiento. Estas proteínas podrían conformar una herramienta para la selección de tratamientos más radicales en ameloblastomas que las expresen.

PALABRAS CLAVE: ameloblastoma acantomatoso, Ki-67, p53.



EXPRESSION OF P53 AND KI-67 IN AMELOBLASTOMAS ACANTHOMATOUS

ABSTRACT
Acanthomatous Ameloblastoma is a histopathological variant where the central portions of odontogenic epithelial cells undergo squamous metaplasia. This biological change could confer more aggressive features and recurrence to the tumour. The aim of this study was to determine the expression of p53 and Ki-67 in acanthomatous ameloblastoma. Methods: 12 specimens histologically diagnosed as acanthomatous ameloblastomas were examined and the expression of p53 and Ki-67 determined immunohistochemically using anti-human antibody clone DO-7 and MIB-1 respectively (DAKO ®). The expression of both proteins was assessed by light microscopy and the intensity and number of positive cells semi-quantified and analyzed using descriptive statistics. Results: The expression of p53 was observed in 50% of the cases both in the basal cells as tumor central islands. The Ki-67 expression was observed in intensely in 66.7% of cases, mainly on basal cell as central. Conclusions: The expression of p53 and Ki-67 in acanthomatous ameloblastomas suggests accelerated cell proliferation and therefore increased capacity for growth. Expression of these proteins may constitute a tool for prognosis and treatment selection.

KEY WORDS: acanthomatous ameloblastomas, p53 protein, Ki-67.


INTRODUCCIÓN

Los tumores odontogénicos representan el 9 % del área de cabeza y cuello y dentro de ellos el ameloblastoma representa el 1% 1-4. El ameloblastoma es una neoplasia odontogénica benigna pero clínicamente persistente e invasiva. Los mecanismos de oncogénesis, citodiferenciación y progresión del tumor son aún desconocidos5.

Según la Organización Mundial de la Salud el ameloblastoma convencional (sólido o multiquístico) posee cinco variantes histológicas a saber: folicular, plexiforme, acantomatoso, de células basales y de células granulares6. El ameloblastoma acantomatoso es una variante histopatológica poco común, donde las porciones centrales de las células epiteliales odontogénicas sufren una metaplasia escamosa6,7.

Identificar la actividad proliferativa e invasiva de un tumor puede ser útil para predecir su comportamiento1. A pesar de numerosos estudios, la correlación entre los patrones histológicos y el comportamiento clínico no han sido claramente establecidos. Las proteínas p53 y Ki-67 han sido usadas para determinar la tasa de proliferación de muchos tumores, incluyendo el ameloblastoma y otros tumores odontogénicos 2.

P53 es bien reconocido como un gen de supresión tumoral, activado bajo estrés celular incluyendo daño al ADN e hipoxia. En más de la mitad de todos los tumores, hay una pérdida completa de la función en p53 debido a una mutación puntual en el alelo junto con una inactivación completa del otro alelo8. La expresión de proteína Ki-67 se asocia con la proliferación celular. La proteína Ki-67 está presente durante todas las fases activas del ciclo celular, G1, S, G2 y mitosis, pero está ausente en las células en arresto (G0). Esta propiedad lo convierte en un excelente marcador para la determinación de la fracción de crecimiento de una población de células9.

Se ha demostrado que una sobreexpresión de p53 y Ki-67 está relacionada con un aumento en la capacidad proliferativa de los ameloblastomas1,8. Sin embargo, a nuestro saber, no existen estudios inmunohistoquímicos, publicados hasta la fecha, realizados específicamente a esta rara variante del ameloblastoma descrito como acantomatoso. El propósito de este estudio fue determinar la expresión de p53 y Ki-67 en un grupo de ameloblastomas acantomatosos.


DISEÑO METODOLÓGICO

POBLACIÓN

Se realizó un diseño de estudio clínico observacional transversal. Se examinaron 12 especímenes diagnosticados histopatológicamente como ameloblastomas acantomatosos. Los diagnósticos fueron corroborados bajo microscopio de luz por un investigador experto siguiendo los parámetros establecidos por la Organización Mundial de la Salud 6. Los casos fueron seleccionados y los bloques de parafina colectados para su procesamiento inmunohistoquímico. Los datos género, edad y ubicación del tumor fueron extraídos de las historias de envío de estudio histopatológico.


TÉCNICA DE INMUNOHISTOQUÍMICA

El marcaje inmunohistoquímico fue realizado en cortes de 3µm aproximadamente de los bloques de parafina. Los cortes fueron desparafinados a través de una serie de baños de xilol y luego rehidratados en alcoholes. La actividad de la peroxidasa endógena fue bloqueada por peróxido de hidrógeno al 0.03% (EnVision™ DAKO®) por 15 minutos a temperatura ambiente. Para la recuperación del antígeno las muestras fueron tratados en microondas durante 15 minutos con solución Target Retrieval Solution (DAKO®). Posteriormente las muestras fueron incubadas por 1 hora en cámara húmeda con los anticuerpos primarios anti-humanos anti-p53 y anti-Ki67 (clones DO-7 y MIB-1 respectivamente, marca DAKO®) a dilución de 1:100. Luego del lavado las muestras fueron incubadas con el complejo secundario usando el kit EnVision™ (DAKO®). Las reacciones inmunohistoquímicas fueron desarrolladas con diaminobenzina como sustrato cromógeno de la peroxidasa y los cortes contrastados con hematoxilina.

SEMICUANTIFICACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE P53 Y KI-67

La expresión de ambas proteínas fue evaluada mediante microscopio de luz con un aumento de 40X por un experimentado investigador. Se determinó la positividad del marcaje de todas las muestras para ambas proteínas. La intensidad del marcaje para los casos positivos fue clasificada en leve, moderada e intensa. El número de núcleos positivos fueron cuantificados por campo en las islas tumorales, contando 10 campos obteniendo la media ± desviación estándar de células/campo y se discriminó su ubicación dentro del parénquima en células basales o centrales.

VARIABLES CUANTIFICADAS
  • Edad del paciente

  • Género del paciente

  • Ubicación de la lesión

  • Expresión de p53, número de células positivas, intensidad del marcaje y ubicación de las células p53 positivas.

  • Expresión de Ki-67, número de células positivas, intensidad del marcaje y ubicación de las células Ki-67 positivas.
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Los resultados fueron recolectados y analizados mediante estadística descriptiva. Las variables numéricas fueron calculadas en medias ± desviaciones estándares, las variables categóricas fueron expresadas en porcentajes y rangos.


RESULTADOS

Los casos fueron distribuidos etariamente entre 30 y 54 años con un promedio de 38,5±11,84 años de edad, distribuidas uniformemente según el género (6 casos femeninos y 6 casos masculinos).

Con respecto a la ubicación del tumor, el 66,66% de las lesiones se localizaron en la mandíbula (8 casos), el 62,5% de éstas en la zona posterior derecha (5 casos) y el 37,5% en la zona posterior izquierda (3 casos). Solo una lesión se ubicó en el maxilar (8,33%). En el 25% de los casos (3 pacientes) no se aportó esta información.

Según la expresión de la proteína p53, el 50% de las lesiones fueron positivas para p53 (6 casos). Esta expresión fue débil en el 66,66% de los casos, moderada en un 16,66% y sólo el otro 16,66% presentó un marcaje intenso. El promedio de células p53-positivo por campo fue de 60,5±46,55 células ubicadas, en todos los casos, tanto en la porción central como basal de las islas tumorales

Tabla 1
Expresión de las proteínas p53 y Ki-67 según el número de células que los expresan, intensidad y ubicación.

La expresión de la proteína Ki-67 fue observada en el 66,66% de los casos (8 pacientes). A diferencia de de p53, el 100% de los casos positivos para Ki-67 mostró un marcaje intenso. El promedio de células Ki-67-positivas por campo fue de 56,75±45,87 células, las cuales se distribuyeron en su mayoría (62,5% de los casos positivos) en las porciones centrales y basales de las islas tumorales, mientras que el 37,5% se observó exclusivamente en la porción basal (Tabla 1).


DISCUSIÓN

Las mutaciones en el gen p53 se encuentran entre las más comunes alteraciones genéticas que ocurren en el cáncer humano. Muchos autores sugieren que la inactivación del gen p53 confiere una selectiva ventaja para las características fenotípicas del tumor 10. Es por ello que la expresión de dicha proteína en muchos de los ameloblastomas sólidos pudiera explicar el comportamiento agresivo de los mismos.

En la mayoría de los estudios que relacionan a la proteína p53 con distintas variantes de ameloblastomas sólidos se ha observado una positividad que varía entre el 52,9% hasta un 100% de los mismos 8,10, sin embargo no se encontró en ninguna de estas series el estudio de la variante acantomatosa que en nuestro estudio mostró positividad para p53 en la mitad de los casos estudiados.

En cuanto a la ubicación de las células que expresan p53, Sharifi-Sistani et al. y Florescu et al.8,10 observaron que las mismas se encontraban confinadas a la porción basal de las islas tumorales exclusivamente, en contraste con nuestros resultados en los que se localizaron tanto en la porción basal como central de las islas tumorales. La expresión en la totalidad del parénquima podría explicar el carácter mayormente invasivo de esta variante histológica.

Los marcadores de proliferación celular como Ki-67 también han sido usados tanto en tumores benignos como malignos para tratar de determinar la relación de su expresión con el comportamiento de los mismos. La proteína Ki-67 ha sido comúnmente descrita en ameloblastomas 1,2,10, sin embargo en nuestro estudio no todos los casos expresaron dicha proteína. La expresión de Ki-67 en los ameloblastomas acantomatosos pudiera ser una herramienta de evaluación de comportamiento clínico, pues este tumor ha mostrado diferentes grados de agresividad, posiblemente dependiente del grado de celularidad.

Sandra y colaboradores describieron reportaron en el año 2002 dentro de una serie de ameloblastomas, 3 casos de la variante acantomatosa, observando células Ki-67 positivas en las células basales de las islas tumorales concluyendo que sólo en éstas había actividad proliferativa mientras que las porciones centrales se encontraban células maduras no reproductibles1. Resultados de nuestro estudio contrastan con los hallazgos de Sandra et al., pues la expresión de Ki-67 fue observada tanto en las células basales con en la porción central de las islas que mostraban metaplasia escamosa. La expresión de Ki-67 en las porciones centrales se traduce como una capacidad aumentada del tumor de proliferar en toda la extensión del parénquima.

Lo poco común de esta variante histológica del ameloblastoma se ve reflejado en los escasos estudios de inmunohistoquímica que al respecto se le han realizado11. Los resultados de nuestro estudio sugieren que el comportamiento en la porción central de las islas tumorales pudiera explicar lo controversial de su comportamiento biológico.


CONCLUSIONES

La expresión de las proteínas p53 y Ki-67 fue observada en ameloblastomas acantomatosos en la zona basal como central de las islas tumorales. La expresión y ubicación de p53 y Ki-67 parecieran sugerir un comportamiento biológico más agresivo y por ende un tratamiento menos conservador podría ser requerido en esta forma de ameloblastomas, sin embargo es imperativo aumentar el número de casos y desarrollar mayor número de estudios que permitan confirmar y validar los resultados de la presente investigación.


REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
  1. Sandra F, Mitsuyasu T, Nakamura N, Shiratsuchi Y, Ohishi M. Immunohistochemical evaluation of PCNA and Ki-67 in ameloblastoma. Oral Oncol 2001; 37:193-198.

  2. Yoon HJ, Jo BC, Shin WJ, Cho YA, Lee JI, Hong SP, Hong SD. Comparative immunohistochemical study of ameloblastoma and ameloblastic carcinoma. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 2011; 112(6):767-76

  3. Sandra F, Nakamura N, Kanematsu T, Hirata M, Ohishi M. The role of MDM2 in the proliferative activity of ameloblastoma. Oral Oncol. 2002; 38:153-157.

  4. Luo DY, Feng CJ, Guo JB. Pulmonary metastases from an Ameloblastoma: Case report and review of the literature. J Craniomaxillofac Surg. J Craniomaxillofac Surg. 2012; 40(8):e470-4.

  5. Luo HY, Yu SF, Li TJ. Differential expression of apoptosis-related proteins in various cellular components of ameloblastomas. Int J Oral Maxillofac Surg. 2006; 35(8):750-5

  6. Barnes L, Eveson J, Reichard P, Sidransky D. World Health Organization classification of tumors: Pathology and genetics of head and neck tumors. Lyon: IARC; 2005.

  7. Bucci E, Lo Muzio L, Mignogna MD, Zeppa P, di Lauro F. [Acanthomatous ameloblastoma. Histological aspects and prognostic implications]. Minerva Stomatol. 1987; 36(1-2):59-6

  8. Sharifi-Sistani N, Zartab H, Babakoohi S, Saghravanian N, Jamshidi S, Esmaili H, Mohtasham N, Zamanzadeh M, Abbaszadeh-Bidokhty H. Immunohistochemical Comparison of the Expression of p53 and MDM2 Proteins in Ameloblastomas and Keratocystic Odontogenic Tumors. J Craniofac Surg 2011; 22(5): 1652-1656.

  9. Endl E, Gerdes J. The Ki-67 protein: fascinating forms and an unknown function. Exp Cell Res. 2000; 257(2):231-7.

  10. Florescu A, Simionescu C, Ciurea R, Pitru A. P53, Bcl-2 and Ki-67 immunoexpression in follicular solid ameloblastomas. Rom J Morphol Embryol 2012; 53(1):105-9.

  11. Bansal M, Chaturvedi TP, Bansal R, Kumar M. Acanthomatous ameloblastoma of anterior maxilla. J Indian Soc Pedod Prev Dent. 2010; 28(3):209-1